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中性木聚糖酶測試盒

簡要描述:中性木聚糖酶測試盒(比色法)/中性半纖維素酶測試盒(比色法) 中性木聚糖酶(Neutral Xylanase,NEX)測定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-05-06
  • 訪  問  量:419

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

中性木聚糖酶測試盒(比色法)/中性半纖維素酶測試盒(比色法)

測定意義:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中,NEX一般分離自最適生長pH為6-8的微生物。

測定原理:

NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊中發(fā)生顯色反應(yīng),在540nm處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率,可計算NEX活力。

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋,可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

緩沖液:液體65mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。(若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀,可60℃加熱溶解后使用)。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

粗酶提取:

  1. 發(fā)酵液:發(fā)酵液于8000g,4℃,離心15min,取上清,作為待測樣品。

  2. 酶干粉:稱約0.1mg,加1mL緩沖液溶解待測。

  3. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL緩沖液)進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清待測。

測定操作表:

  1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至540nm。

  2. 操作表


對照管

測定管

樣品(μL)

60

60

緩沖液(μL)

90

90

試劑一(μL)


60

試劑二(μL)

90


混勻,蓋緊瓶蓋,50℃水浴,反應(yīng)30min,立即沸水浴20min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進水,改變了反應(yīng)體系)

試劑一(μL)

60


試劑二(μL)


90

混勻,沸水浴顯色5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A(chǔ),計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

NEX計算公式:

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y = 1.6904x + 0.0058,R2 = 0.9989

1. 按液體體積活力計算:

酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。

NEX活力(nmol/min/mL)= (ΔA-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 657× (ΔA-0.0058)

2. 按蛋白濃度計算:

酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。

NEX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA -0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算:

酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。

NEX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA -0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W

 

150:木糖的分子量;T:反應(yīng)時間,30min;稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;

106:轉(zhuǎn)化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.8452x + 0.0058,R2 = 0.9989

1. 按液體體積活力計算:

酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。

NEX活力(nmol/min/mL)= (ΔA-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106

= 1315× (ΔA-0.0058)

2. 按蛋白濃度計算:

酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。

NEX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA -0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr

= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算:

酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。

NEX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA -0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W

= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷W

 

150:木糖的分子量;T:反應(yīng)時間,30min;稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;

106:轉(zhuǎn)化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。

注意事項:

1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間,否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變;也可以延長或者縮短反應(yīng)時間。

2. 試劑盒2-8℃保存,保質(zhì)期3個月,建議盡快使用。



上海牧榮生物科技有限公司

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  5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

中性木聚糖酶測試盒(比色法)/中性半纖維素酶測試盒(比色法)




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